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中药活性筛选与活性追踪实验
  • 发布日期:2018-06-13      浏览次数:90
      • DPPH法
      实验方法原理DPPH (2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基,2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一种比较稳定的脂性自由基,其N上有一个游离电子,其乙醇溶液呈紫色,在517 nm处有最大的吸收峰。加入抗氧化剂以后,DPPH捕捉一个电子与游离电子配对,紫色褪去,变为无色物质,在517 nm处的吸收消失,其褪色程度与其接受的电子数成定量关系。依此原理用分光光度计检测DPPH自由基与试样液反应后吸光值的变化,可检定试样提供氢原子、清除自由基抗氧化的能力。该法简便易行,灵敏可靠,不失为筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一。
      实验材料

      虎杖厚朴黄芩地榆前胡绞股蓝麦冬葛根菊花白芍

      试剂、试剂盒

      DPPH无水乙醇二甲基亚砜维生素C

      仪器、耗材

      圆底烧瓶旋转蒸发仪真空干燥机酶标板酶标仪

      实验步骤1.  中药材选择:学生自选4种药材

      备选药材:虎杖、厚朴、黄芩、地榆、前胡、绞股蓝、麦冬、葛根、菊花、白芍

      2.  中药提取

      分别将适当切碎的中药材20 g放入250 ml圆底烧瓶中,各加入10倍量乙醇,回流提取1次,过滤后提取液用旋转蒸发仪浓缩,并用真空干燥机干燥,备用。

      3.  试剂的配制

      DPPH溶液:称取3.2 mg DPPH溶解于40 ml无水乙醇中,摇匀,备用。
      提取物溶液:用二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂配成浓度为5 mg/ml的溶液,备用。测定时稀释成相应浓度。
      维生素C溶液:DMSO作为溶剂配成浓度为0.5 mg/ml的溶剂,备用。

      4.  活性药材的筛选

      取10 μL的样品溶液放入酶标板中,再加入90 μL的DPPH溶液,以维生素C溶液做阳性对照,以DPPH溶液作为标准,样品溶液为空白,室温放置30 min后,酶标仪517 nm测定,利用以下公式计算各种样品的清除率(k),每个样品测定2次(按下图所示加样)。

      k = [ 1 - (Ae - A0 ) ] /(AD - AD0) ×100 %

      式中:
      Ae -- DPPH + 提取物混合溶液的吸光度
      A0 -- 提取物溶液的吸光度
      AD -- DPPH溶液的吸光度
      AD0 -- DMSO+乙醇的吸光度

      5.  活性药材的活性成分追踪

      自主设计实验,对通过上述活性筛选出的活性zui好的药材,进行提取和分离,对不同的流份进行进一步的活性追踪评价。
     
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